TP Diurèse osmotique chez le rat

TP n°3: Diurèse osmotique

et perméabilité rénale chez le rat

5. Objectif du TP

1. But du TP

Comparer différentes diurèses osmotiques (diurèse au mannitol, à l’urée, et au NaCl)  chez le rat et étudier la perméabilité rénale.

1. Principe de TP

1. Déterminer le débit urinaire de base du rat (qui servira de témoin)
2. Déterminer la diurèse osmotique de différentes solutions, en injectant celle-ci dans la circulation sanguine à l’aide d’une canule dans la veine jugulaire
3. Étudier la perméabilité rénale en injectant un mélange de solutions de bleu Evans et de Rouge de Phénol. Ces substances sont introduites dans le sang car la circulation sanguine et rénale sont liés.

La diurèse osmotique, est la perte d’eau sous forme d’urine suite à une injection de molécules osmotiquement actives. Elle se déclenche par l’élévation de la pression osmotique (exprimé en atmosphère) du plasma sanguin.

Une molécule osmotique active est une molécule qui retient l’eau c’est-à-dire qu’elle va s’entourer de molécules d’eau : plus il y aura de molécules osmotiques, plus des molécules d’eau seront attirées, plus la diurèse sera forte.

1. Présentation du TP

Premièrement, peser le rat préalablement anesthésié. Puis, fixer l’animal sur le dos à l’aide de lacets (le nouer aux membres inférieurs et supérieures à la lumière).

Insérer un cathéter dans la vessie, puis une canule dans la veine jugulaire (cf TP1).

1. Mesure du débit urinaire de base

• A l’aide d’un papier “essuie-tout”, relever le nombre de gouttes qui arrive par le cathéter pendant 10 minutes.
  Attention ! Si le rat n’urine pas, voire très peu, déclencher une diurèse au mannitol : injecter en 1 minute, 1 ml  de solution de mannitol puis compter le nombre de goutte pendant 10 minutes.

1. Diurèse Saline (NaCl)

• Injecter 0,3 ml de NaCl minute par minute, pendant 10 minutes (0,1 ml pour 100 g de poids)
• Compter les gouttes minute par minute pendant  les 10 minutes d’injection
• Compter les gouttes pendant les 10 minutes qui suivent l'arrêt de l’injection
  Attention ! Continuer à compter jusqu’à un retour à la normal du débit urinaire

1. Diurèse à l’Urée

• Injecter 0,3 ml d’urée minute par minute, pendant 10 minutes (0,1 ml pour 100 g de poids)
• Mesurer le débit urinaire de la même façon que précédemment

1. Diurèse au Mannitol

• Injecter 0,3 ml de mannitol minute par minute, pendant 10 minutes  (0,1 ml pour 100 g de poids)
• Mesurer le débit urinaire de la même façon que précédemment

1. Etude de la perméabilité rénale

• Injecter 1 ml de solution NaCl contenant du bleu Evans et du Rouge de Phénol
• Recueillir l’urine dans un tube à hémolyse contenant du NaOH. Noter le temps d’apparition (en minutes) de l’urine de couleur jaune ayant les molécules injectées dans le sang (devient rose en contact du NaOH,solution basique).

1. Résultats

Poid du rat = 281 g

Débit urinaire de base : 6 gouttes en 10 minutes (= 0,6)

• Débit urinaire saline (NaCl) : 44 gouttes en 25 minutes donc 1,76 gouttes / min.

• Débit urinaire urée : 39 gouttes en 20 minutes donc 1,95 gouttes / min.

• Débit urinaire mannitol : 20 gouttes en 20 minutes donc 1 gouttes / min.

Notre rat avait un métabolisme très lent. Son débit urinaire de base était  faible (0,6) même après avoir déclenché deux diérèses au mannitol. En effet, pour chaque diurèse, les résultats obtenus ont été très faibles  (entre 1 et 2 gouttes par minute) et incohérents. De plus, lors de l’injection de la solution de  NaCl contenant du bleu Evans et du rouge de phénol, notre rat n’a pas uriné ce produit, après plus de 20 min d’attente.

Nous allons donc prendre les résultats d’un autre groupe pour comparer les différentes diurèses et conclure sur cette expérience.

1. Etude des différentes diurèses

Poid du rat (Prat) = 334 g

Débit urinaire de base : 11 gouttes en 10 minutes (= 1,1)

• Débit urinaire saline (NaCl)

80 gouttes en 20 minutes donc 4 gouttes / min.

• Débit urinaire urée

122 gouttes en 20 minutes donc 6,1 gouttes / min.

• Débit urinaire mannitol

251 gouttes en 20 minutes donc 12,55 gouttes / min.